TC、TG实验方法

发布时间：2014/2/7 16:53:15　浏览次数：16335　[字号：大 中 小]　 [关闭此页　打印此页]

一、组织样本

1、同样还是用等渗缓冲液，按重量体积1：9，制备匀浆，2500rpm*10min，取上清即10%匀浆用于TG、TC的测定（提取的不完全，但也能测定）

2、用有机溶剂提取，a:用无水乙醇作匀浆介质，按上面方法制备匀浆待测，提取效果比等渗缓冲液好

                      b:用特殊有机溶剂提取（如氯仿甲醇混合液等）提取效果好，但由于高挥发，测定不准确，所以一般需用N2吹干后用无水乙醇复溶后进行测定。

 

 

二、培养细胞

   1、用PBS洗细胞

2、加入500ul乙醇，使之铺满培养皿，培养皿内的细胞泛白时把培养皿斜放，用细胞刮板将细胞刮下来，使细胞浸泡在乙醇中

   3、用移液器把细胞和乙醇移到玻璃匀浆器中，碾磨3分钟成悬液

   4、收集悬液，4000 rpm*10min离心，取上清50ul测定

 

 

三、奶样

新鲜或者冻存的奶样本，用无水乙醇按照不同比例进行提取（奶样：无水乙醇=1：1、1：4、1：9、1：19、1：49、1：99）充分漩涡混匀2分钟，4000转/分离心10分钟，取上清按操作表操作。

按稀释度、结果做浓度曲线，取直线线性段的浓度为宜。

细胞爬片制备详细过程

5-羟色胺