鱼体肝脏匀浆做一些指标的取样浓度?
发布时间:2014/2/8 9:00:59 浏览次数:4917 [字号:大 中 小] [关闭此页 打印此页]
之前我们用贵所的蛋白质,总SOD、CAT、MDA、试剂盒测定过程当中都有一个最佳取样量摸索的问题,现在我们试图增加新指标,分别是羟自由基,GSH、GSH-PX、GSH-ST、GR的试剂盒,在阅读完说明书我们发现其中有几样指标并没有给出最佳取样量的说明,有羟自由基,GR、GSH-ST、GSH。因为我们做的是鱼体肝脏匀浆,并不是通常测定的小鼠肝脏匀浆,在匀浆浓度上我们可能还需要更多的参考,请问有什么意见可以给我在各个指标测定中匀浆浓度有更多的参考依据。
另外样品测定过程中不可避免的会遇到样品保存的问题,匀浆完保存样品在测定上会不会有较大的影响呢,因为样本是鱼体肝脏,不像老鼠肝脏会比较大块,我们不能保存肝脏样,会将其匀浆后保存
另外在自由基测定上,试剂二应用液配制针对抑制和产生自由基有不同的配法,我对备注中给出的对组织样品会抑制自由基有点疑惑,是否可以麻烦解答。
回复:
1、从肝匀浆的测定记录来看,GR、GSH、GSH-ST一般都是直接用10%匀浆进行测定。但是羟自由基试剂盒,都需要做预实验(随货说明书上有附录,专门关于预实验的操作详细流程)
2、关于样本的保存,一般我们都是建议直接保存组织,一旦制备匀浆以后相关指标的稳定性都不好!像老师的指标,羟自由基、GR最好是要当天完成,GSH-ST和GSH可以第二天完成(4℃密封保存)
3、羟自由基测定,我们试剂盒主要检测的是抑制羟自由基的能力和产生羟自由基能力,动物实验(血清、组织)包括细胞试验,一般都是表达出抑制羟自由基为主。如果老师测定肝组织的话,试剂二肯定是按照抑制羟自由基的来配制的!
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