小鼠脑组织匀浆测定SOD、羟自由基的问题？

发布时间：2014/2/8 10:04:48　浏览次数：8718　[字号：大 中 小]　 [关闭此页　打印此页]

我采用的是连续波长的酶标仪

1. 测SOD用的是1%的小鼠脑组织匀浆100ul进行测定的，波长按说明书的550nm，加200ul到96孔板测定的，预实验时用了60、80、100ul三个剂量，也都是测到负值，把负值变正后，100ul的百分抑制率在15-55%之间。所以都用了100ul的。我测的对照管OD 0.19，而测定管OD都比这个值大。

2.羟自由基测定时因为试剂量有限，按照师兄之前做的经验，也是取的1%的小鼠脑组织匀浆。测的标准空白管OD 0.30左右，标准管OD 0.53左右，请问和贵公司以往结果是否相符，另外能否给我一个对照管的OD，因为当时试剂污染了，没有测到。

3.考马法测蛋白也是取的1%的组织匀浆，还稀释标准品后做了标准曲线的，空白是0.212，0.563g/L标准液0.27，出现负值的OD值介于0.16-0.20.酶标仪取的波长是595nm，我将样本、标准及试剂均减半量，最后96孔板也是取的200ul。胆碱酯酶也是取的1%组织匀浆，测定OD值在0.30左右，对照管OD值小于这个值。酶标仪选择波长520nm，取样量也都减半，最后96孔板都取200ul。

回复：

查我们检测记录，羟自由基对照管一般吸光度在0.7-0.8！1cm光径测定，标准与标准空白的差值一般在0.4多，老师用200微升上96孔板，比色光径在0.5cm左右，所以您的差值在0.2多还是可以的！SOD和考马可以放到一起考虑，查我们检测记录，1%脑组织匀浆，蛋白浓度一般在0.3-0.4g/L左右，同时SOD则取50微升左右测定；但是现在老师的情况是，用1%的匀浆，蛋白浓度还有部分是负值，测定不出，那说明样本中总蛋白浓度也偏低，相应的其中SOD活性肯定也会降低！这种情况下，SOD和蛋白浓度测定，都需要加大浓度来进行检测！（顺便问下，老师测定所用的匀浆上清是当天制备的还是保存的？）CHE测定，用1%匀浆浓度太低了，老师应该用10%匀浆测定一下！ 

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