ATP含量测定的一些问题？

发布时间：2014/2/8 10:06:21　浏览次数：3790　[字号：大 中 小]　 [关闭此页　打印此页]

每次测量都是用新的EP管，漩涡混匀器充分混匀。用分光光度计测量。比色皿都是经过4遍纯水冲洗。有5个问题还请帮我回答一下：

1.由于我们没有0.5cm光径的比色皿，所以在加入终止剂后又用蒸馏水对原液进行了4稀释（吸光度就在1以下了）。这样可以吗？

2.你们有没有出现过测定管值小于对照管的现象。

3.体系中加入终止剂后，经过稀释为什么有的体系中会出现悬浮物？这是怎么回事？

4.显色应用液的配制：显色剂甲液是7ml/瓶，显色剂乙液是6ml/瓶。用时将两液混匀即可。如果这样做的话那么总液量是不是就有13ml了？我一次实验用不了这么多的显色液，比如只用6.5ml。是不是就取甲液3.5ml、乙液3ml呢？

5.这是试剂盒是不是你们最新推出的产品。稳定吗？

回复：

1、最终显色液我们一般不考虑稀释，虽然理论上都是水相，但是本身ATP含量就比较低，再稀释更容易出现测定不出的情况。

2、查批量检测记录有个别样本中ATP表达很低的情况下，会出现测定管等于或略小于对照管的现象。

3、反应体系，加终止剂后，沉淀蛋白终止反应，所以体系会出现絮状物，混匀成浑浊，离心后有沉淀，上清澄清透亮。

4、显色剂甲乙液，可以根据需要量吸出后配制，当然如果一次性配完后，5天内使用没有问题。

5、ATP含量试剂盒推出不久，由于样本中表达不高，显色剂灵敏度很高，出现误差也是可能的

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