细胞前处理

发布时间：2014/5/27 15:12:18　浏览次数：6577　[字号：大 中 小]　 [关闭此页　打印此页]

养的是人脐静脉内皮细胞，用25cm2的培养瓶养的，我们这里没有超声破碎仪和研磨器，之前有同学用反复冻融后再加裂解液的方法，结果不是很理想，刚才打电话咨询咱们技术工程师他说可以用匀浆器，我们的匀浆器是PRO200  Bio-Gen siries  serial NO.是02-0473，一搬都是裂解组织的，不知道这种可以裂解细胞吗？如果可以，基于我们实验室条件有限，您建议我们怎么做实验结果会好些呢？麻烦您把实验的步骤发给我好吗？我们刚刚做实验，有些东西不够了解，麻烦您讲的详细些。还有就是测SOD、CAT、GSH-PX、MDA时，细胞处理的过程都一样吗， 我还想再咨询下，如果用这个匀浆器，细胞量少会不会贴到匀浆器的转子上，也会影响结果呢？如果用化学裂解的方法呢？您建议用哪个厂家的裂解液呢，25cm2的培养瓶您建议一瓶加多少裂解液呢？

这个根据收集细胞数量，培养细胞的前处理：将培养细胞消化，1000～1500转/分钟离心10分钟，弃上清，留下层细胞，每管加0.3～0.5ml生理盐水或匀浆介质制备成106/cm3细胞悬液，即106/ml，再进行破碎。破碎细胞的方法有三种：①、用匀浆器匀浆。②、用超声粉碎器粉碎。③、反复冻溶3次（第③种方法有时会影响酶活力）。制备好的细胞悬液一般不需要离心。细胞数量较大可以适当加大匀浆介质量。至于老师考虑的会黏附到匀浆管上，这样会有一定量的损失，总体不会干扰测定结果。裂解液考虑到成分可能干扰反应，所以不推荐使用，或者使用相对温和的裂解液Triton X-100.建议最好采用物理方法破碎细胞

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