细胞上清测定LDH问题
发布时间:2014/6/5 8:32:54 浏览次数:7856 [字号:大 中 小] [关闭此页 打印此页]
测的是小鼠肝癌细胞培养上清的LDH,实验设计时设了LDH最大释放孔(在细胞上清对比加入2%Triton)和自然释放孔(细胞上清对比加入空培养基)。最大释放孔LDH测定值比自然释放孔还低,不明白原因。
tritonX100是一种表面活性剂。具有疏水端和亲水端,它可以将膜蛋白从细胞膜上解离下来,从而达到提取膜蛋白的目的,但是其没有维持酶活的作用。过量的tritonX100反而会破坏蛋白的表面亲水层而破坏蛋白结构,降低酶活。Triton X-100可以提高真核细胞细胞膜的通透性,但时常使用含 0.1%-0.5%Triton X-100的PBS或TBS。老师采用的浓度是否过高,导致酶活力丧失原因。
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